致泻性大肠埃希氏菌五重 PCR 试剂盒
产品名称：致泻性大肠埃希氏菌五重 pcr 试剂盒产品规格：50t/盒
产品货号：klp08-a0231
产品简介：
大肠埃希氏菌是一类能引起人体以腹泻症状为主的病原菌，常见的致泻大肠埃希氏菌主要包括肠道集聚性大肠埃希氏菌（enteroaggregativeescherichiacoli, eaec）、肠道致病性大肠埃希氏菌（enteropathogenicescherichiacoli， epec）、产志贺毒素大肠埃希氏菌(shigatoxin-producingescherichiacoli,stec) (包括肠道出血性大肠埃希氏菌（enterohemorrhagicescherichiacoli，ehec）)、产肠毒素大肠埃希氏菌（enterotoxigenicescherichiacoli，etec）、肠道侵袭性大肠埃希氏菌（enteroinvasiveescherichiacoli,eiec）。该菌广泛存在于自然界，当其污染食品或水源后，可引起细菌性食物中毒或水源性腹泻病爆发流行，所以致泻大肠埃希氏菌的检测对社会卫生健康具有极da的意义。
为了满足致泻大肠埃希氏菌检测及研究的需要，本公司根据标准gb4789.6合成了致泻大肠埃希氏菌特征性基因特异性引物，并优化形成本试剂盒。应用本试剂盒进行检测具有快速、灵敏、特异、准确、操作简单等特点及优点。
包装规格及成分：
编号
成分
规格
试剂一
致泻大肠埃希氏菌五重 pcr 反应液
1 ml×1 管
试剂二
阳性对照
200 µl×1 管
试剂三
阴性对照
200 µl×1 管
使用说明书
1 份
运输及保存：低温运输，-20℃保存。操作步骤：
一、样本制备（参考gb4789.6）
固态或半固态样品：固体或半固态样品,以无菌操作称取检样 25 g，加入装有 225 ml营养肉汤的均质杯中，用旋转刀片式均质器以8000r/min~10000r/min均质1 min~2min，或加入装有225ml营养肉汤的均质袋中，用拍击式均质器均质1min~2
min。
液态样品：以无菌操作量取检样 25 ml，加入装有 225 ml 营养肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)，振荡混匀。
二、增菌
将 1 制备的样品匀液于 36℃±1℃ 培养 6 h，取 10 μl ,接种于 30 ml 肠道菌增菌肉汤管内，于 42℃±1℃培养 18 h 。
三、分离
将增菌液划线接种 mac和 emb琼脂平板，于 36℃±1 ℃ 培养 18h~24h,观察菌落特征。在 mac琼脂平板上，分解乳糖的典型菌落为砖红色至桃红色，不分解乳糖的菌落为无色或淡粉色；在 emb 琼脂平板上，分解乳糖的典型菌落为中心紫黑色带或不带金属光泽，不分解乳糖的菌落为无色或淡粉色，应挑取乳糖发酵，以及乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。
四、pcr 模板制备
dna提取:使用 1μl接种环刮取营养琼脂平板或斜面上培养 18h~24h的菌落悬浮在200μl0.85%灭菌生理盐水中，充分打散制成菌悬液，于13000r/min离心3min，弃掉上清液。加入1ml灭菌去离子水充分混匀菌体，于100℃水浴或者金属浴维持10min；冰浴冷却后13000r/min离心3min，收集上清液；按1∶ 20的比例用灭菌去离子水稀释上清液，取 5μl作为 pcr检测的模板；可用细菌基因组提取试剂盒提取细菌 dna，操作方法按照*说明书进行。dna保存:所有处理后的 dna模板直接用于 pcr反应或暂存于 4℃ 并当天进行pcr反应；否则，应在-20℃ 以下保存备用 1 周。也可用*提取细菌 dna，操作方法按照*说明书进行。五、试剂准备
扩增试剂准备（在反应混合液配制区进行）：从试剂盒中取出 pcr反应液，解冻混匀，瞬离后向每个 pcr管中各分装 20μlpcr反应液，转移至样本处理区。加样（在样本处理区进行）：在 pcr反应管内加入 5μl 制备的核酸样本阳性对照或阴性对照，盖上盖子，轻弹混匀并瞬时离心后，立即转移至检测区进行反应。总反应体系如下表。试剂
添加量（25 μl）
致泻大肠埃希氏菌五重 pcr 反应液
20 μl
dna 样品/阳性对照/阴性对照
5 μl
六、pcr 检测（在检测区进行） 请按照下表设置反应程序：
阶段
温度设计
循环数
预变性
98℃
30
sec
1 ×
pcr 反 应
98℃
15
sec
30 ×
55℃
30
sec
68℃
10
sec
反应结束后，将产物进行1.8%琼脂糖凝胶电泳，电泳结束后分析其条带情况。
【结果判定方法】结果判定
1)阴性对照：无目的基因条带
2)阳性对照：有目的基因 stx1（244bp）和 sth（171bp）的明显条带。
致泻大肠埃希氏菌类别
阳性基因名称
片段长度（bp）
肠道聚集性大肠埃希氏菌（eaec）
asta
102
肠道致病性大肠埃希氏菌（epec）
escv
544
产志贺毒素大肠埃希氏菌/肠道出血性大肠埃希
氏菌
（stec / ehec）
stx1, escv+ stx1
244 / 544+244
产肠毒素大肠埃希氏菌（etec）
sth
647
肠道侵袭性大肠埃希氏菌（eiec）
ipah
171
注意事项
1.开始检测前请仔细阅读本说明书，按要求操作。
2.组织样品的样本处理和核酸扩增应注意生物安全
3.试剂使用前，应充分融化均匀后，瞬时离心；pcr反应管避免反复冻融。
4.加样时应使样品落入反应液中，不应有样品黏附于管壁上，加样后应尽快压紧管盖。
5.经样品前处理液处理过的样本，不能用于样本保存，仅用于即时检测
6.研磨组织样本不宜过大，以防杂质含量高而抑制后续的 pcr反应。
7.样品前处理液可置于 4℃保存。
8.本产品只能用于科研实验，不能用于临床诊断。
【树莓饮料生产线】发往江苏惠田第二车
南通低温蒸发浓缩设备,乳化液废水处理方案
润滑油加注机参数有哪些
农作物颗粒定量包装机-大米流量称厂家
自来水管道漏水检测
致泻性大肠埃希氏菌五重 PCR 试剂盒
超声波熔接机常用方法有哪些？
马鞍山小区管道短管内衬施工
防爆电子油桶秤 南召隔爆电子秤 无人过磅称重系统常见需求描述：
想要提高开料设备生产效率？数控开料机厂家为您支招！
人脸识别门禁原理是怎样的吗，是否真的那么安全
校平线的作用是什么？
防水补漏贴效果怎么样
PP通风柜——为你的实验室加一层保护吧！
调节阀的术语(一)
日本太阳科学水产，鱼糜行业弹性检测仪SD-700IIDP
德国kroeplin卡规，可测量复杂工件尺寸
热泵辣椒烘干-影响网带式辣椒烘干设备价格的因素你知道吗？
水域核心区助航浮标规格参照
探讨微电子构装銲点可靠度的材料的材料选择问题
产品货号：klp08-a0231
产品简介：
大肠埃希氏菌是一类能引起人体以腹泻症状为主的病原菌，常见的致泻大肠埃希氏菌主要包括肠道集聚性大肠埃希氏菌（enteroaggregativeescherichiacoli, eaec）、肠道致病性大肠埃希氏菌（enteropathogenicescherichiacoli， epec）、产志贺毒素大肠埃希氏菌(shigatoxin-producingescherichiacoli,stec) (包括肠道出血性大肠埃希氏菌（enterohemorrhagicescherichiacoli，ehec）)、产肠毒素大肠埃希氏菌（enterotoxigenicescherichiacoli，etec）、肠道侵袭性大肠埃希氏菌（enteroinvasiveescherichiacoli,eiec）。该菌广泛存在于自然界，当其污染食品或水源后，可引起细菌性食物中毒或水源性腹泻病爆发流行，所以致泻大肠埃希氏菌的检测对社会卫生健康具有极da的意义。
为了满足致泻大肠埃希氏菌检测及研究的需要，本公司根据标准gb4789.6合成了致泻大肠埃希氏菌特征性基因特异性引物，并优化形成本试剂盒。应用本试剂盒进行检测具有快速、灵敏、特异、准确、操作简单等特点及优点。
包装规格及成分：
编号
成分
规格
试剂一
致泻大肠埃希氏菌五重 pcr 反应液
1 ml×1 管
试剂二
阳性对照
200 µl×1 管
试剂三
阴性对照
200 µl×1 管
使用说明书
1 份
运输及保存：低温运输，-20℃保存。操作步骤：
一、样本制备（参考gb4789.6）
固态或半固态样品：固体或半固态样品,以无菌操作称取检样 25 g，加入装有 225 ml营养肉汤的均质杯中，用旋转刀片式均质器以8000r/min~10000r/min均质1 min~2min，或加入装有225ml营养肉汤的均质袋中，用拍击式均质器均质1min~2
min。
液态样品：以无菌操作量取检样 25 ml，加入装有 225 ml 营养肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)，振荡混匀。
二、增菌
将 1 制备的样品匀液于 36℃±1℃ 培养 6 h，取 10 μl ,接种于 30 ml 肠道菌增菌肉汤管内，于 42℃±1℃培养 18 h 。
三、分离
将增菌液划线接种 mac和 emb琼脂平板，于 36℃±1 ℃ 培养 18h~24h,观察菌落特征。在 mac琼脂平板上，分解乳糖的典型菌落为砖红色至桃红色，不分解乳糖的菌落为无色或淡粉色；在 emb 琼脂平板上，分解乳糖的典型菌落为中心紫黑色带或不带金属光泽，不分解乳糖的菌落为无色或淡粉色，应挑取乳糖发酵，以及乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。
四、pcr 模板制备
dna提取:使用 1μl接种环刮取营养琼脂平板或斜面上培养 18h~24h的菌落悬浮在200μl0.85%灭菌生理盐水中，充分打散制成菌悬液，于13000r/min离心3min，弃掉上清液。加入1ml灭菌去离子水充分混匀菌体，于100℃水浴或者金属浴维持10min；冰浴冷却后13000r/min离心3min，收集上清液；按1∶ 20的比例用灭菌去离子水稀释上清液，取 5μl作为 pcr检测的模板；可用细菌基因组提取试剂盒提取细菌 dna，操作方法按照*说明书进行。dna保存:所有处理后的 dna模板直接用于 pcr反应或暂存于 4℃ 并当天进行pcr反应；否则，应在-20℃ 以下保存备用 1 周。也可用*提取细菌 dna，操作方法按照*说明书进行。五、试剂准备
扩增试剂准备（在反应混合液配制区进行）：从试剂盒中取出 pcr反应液，解冻混匀，瞬离后向每个 pcr管中各分装 20μlpcr反应液，转移至样本处理区。加样（在样本处理区进行）：在 pcr反应管内加入 5μl 制备的核酸样本阳性对照或阴性对照，盖上盖子，轻弹混匀并瞬时离心后，立即转移至检测区进行反应。总反应体系如下表。试剂
添加量（25 μl）
致泻大肠埃希氏菌五重 pcr 反应液
20 μl
dna 样品/阳性对照/阴性对照
5 μl
六、pcr 检测（在检测区进行） 请按照下表设置反应程序：
阶段
温度设计
循环数
预变性
98℃
30
sec
1 ×
pcr 反 应
98℃
15
sec
30 ×
55℃
30
sec
68℃
10
sec
反应结束后，将产物进行1.8%琼脂糖凝胶电泳，电泳结束后分析其条带情况。
【结果判定方法】结果判定
1)阴性对照：无目的基因条带
2)阳性对照：有目的基因 stx1（244bp）和 sth（171bp）的明显条带。
致泻大肠埃希氏菌类别
阳性基因名称
片段长度（bp）
肠道聚集性大肠埃希氏菌（eaec）
asta
102
肠道致病性大肠埃希氏菌（epec）
escv
544
产志贺毒素大肠埃希氏菌/肠道出血性大肠埃希
氏菌
（stec / ehec）
stx1, escv+ stx1
244 / 544+244
产肠毒素大肠埃希氏菌（etec）
sth
647
肠道侵袭性大肠埃希氏菌（eiec）
ipah
171
注意事项
1.开始检测前请仔细阅读本说明书，按要求操作。
2.组织样品的样本处理和核酸扩增应注意生物安全
3.试剂使用前，应充分融化均匀后，瞬时离心；pcr反应管避免反复冻融。
4.加样时应使样品落入反应液中，不应有样品黏附于管壁上，加样后应尽快压紧管盖。
5.经样品前处理液处理过的样本，不能用于样本保存，仅用于即时检测
6.研磨组织样本不宜过大，以防杂质含量高而抑制后续的 pcr反应。
7.样品前处理液可置于 4℃保存。
8.本产品只能用于科研实验，不能用于临床诊断。
【树莓饮料生产线】发往江苏惠田第二车
南通低温蒸发浓缩设备,乳化液废水处理方案
润滑油加注机参数有哪些
农作物颗粒定量包装机-大米流量称厂家
自来水管道漏水检测
致泻性大肠埃希氏菌五重 PCR 试剂盒
超声波熔接机常用方法有哪些？
马鞍山小区管道短管内衬施工
防爆电子油桶秤 南召隔爆电子秤 无人过磅称重系统常见需求描述：
想要提高开料设备生产效率？数控开料机厂家为您支招！
人脸识别门禁原理是怎样的吗，是否真的那么安全
校平线的作用是什么？
防水补漏贴效果怎么样
PP通风柜——为你的实验室加一层保护吧！
调节阀的术语(一)
日本太阳科学水产，鱼糜行业弹性检测仪SD-700IIDP
德国kroeplin卡规，可测量复杂工件尺寸
热泵辣椒烘干-影响网带式辣椒烘干设备价格的因素你知道吗？
水域核心区助航浮标规格参照
探讨微电子构装銲点可靠度的材料的材料选择问题