智能水浴冷凝回流提取仪在饲料中维生素 A 检测皂化前处理的应用
维生素是动物所需的五大营养素之一，其中维生素a是视紫红质（感光色素）的重要组成部分，具有维持正常的视觉，促进生长发育，维持上皮结构完整健全和增强动物免疫力等作用。为满足动物生长需求，常在动物饲料中添加。
现行有效的饲料中维生素a测定的国家标准为gb/t 17817-2010 饲料中维生素 a 检测皂化，其前处理方法包括皂化提取法和直接提取法。皂化提取法适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混合饲料和维生素预混合饲料中维生素a的测定。直接提取法仅适用于维生素a含量较高的维生素预混合饲料中维生素a的测定。目前皂化提取过程实验室多自行搭建水浴回流装置，操作繁琐，占用人工。本试验对自行搭建水浴回流装置与一套集成加热、磁力搅拌、自动升降、定时启停、冷热水双浴的阵列水浴回流仪进行比较，试验证明集成一体的阵列水浴回流仪有效优化了皂化前处理过程,达到了简化实验过程，减少人工操作，提升实验效率的目的。
1.材料与方法
1.1仪器
nai-hl10s智能水浴冷凝回流提取仪
《中国药典》浸出物的测定法中醇溶性热浸法 脂肪与脂肪油测定法中药浸提回流法
gb 5009.168-2016 食品安全国家标准 食品中淀粉总酸维生素a、d、e脂肪酸的测定
gb 31604.5-2016 食品安全国家标准 食品接触材料及制品 树脂中提取物的测定
gb/t 5009.127-2003 食品包装用聚酯树脂及其成型品中锗的测定
gb/t 8021-2003 石油产品皂化值测定法
gb/t 17817-2010 饲料中维生素 a 检测皂化
gb/t 10345-2022 白酒分析方法（总酯和酸酯总量的测定）
土壤分析技术规范 甲亚胺-h比色法 土壤中硼的测定（提硼回流装置-石英冷凝回流提取仪）
1.2标准品、试剂
维生素a乙酸酯标准品，含量≥99%。
无水，分析纯，经检验无过氧化物；无水乙醇，分析纯；甲醇，色谱纯；2,6二叔丁基对甲酚（bht），分析纯；无水硫酸钠，分析纯；氮气（纯度99.9%）；碘化钾溶液100g/l；淀粉指示剂5g/l；硫代硫酸钠溶液50g/l;氢氧化钾溶液500g/l；l-抗坏血酸溶液5g/l；酚酞指示剂10g/l。
1.3标准溶液配置
维生素a标准储备液：称取维生素a乙酸酯标准品34.3mg（精确至0.0001g）于皂化瓶中，按前处理方法进行皂化和提取，将提取液全部浓缩蒸发至干，用正己烷溶解残渣置入100ml棕色容量瓶中并稀释至刻度，混匀，4℃保存。
维生素a标准工作液：准确吸取1.00ml维生素a标准储备液置于100ml棕色容量瓶中，用氮气吹干，用甲醇稀释至刻度，混匀。
1.4前处理方法
称取配合饲料10g于250ml圆底烧瓶中，加入50ml l-抗坏血酸溶液，使试样分散、浸湿，加10ml氢氧化钾溶液，混匀。置于沸水浴上回流30min，不时振荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，分别用5ml无水乙醇、5ml水自冷凝管顶端冲洗其内部，取出烧瓶至冷水浴中冷却至40℃。
定量转移全部皂化液于盛有100ml无水的500ml分液漏斗中，用50ml水分3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗，加盖、放气、随后混合，激烈振荡2min，静置、分层。转移水相于第二个分液漏斗中，分别用100ml、60ml重复提取两次，弃去水相，合并三次相。用水每次100ml洗涤提取液至中性。提取液通过无水硫酸钠脱水，转移至250ml棕色容量瓶中，加100mg bht使之溶解，用定容。
从提取液中分取适当体积旋转蒸干，残渣用甲醇溶解后过0.45um膜过滤，进样测试。
1.5仪器条件
色谱柱：c18型柱；
流动相：甲醇+水（95:5）；
流速：1.0ml/min；
柱温：室温；
进样量：20ul；
检测波长：326nm。
2.结果与讨论
2.1皂化前处理装置对比
皂化前处理是维生素a测试关键前处理过程，传统人工搭建水浴回流装置，操作繁琐，占用人工。皂化前处理过程中，需要不时振荡以防止试样粘附在瓶壁上，实验人员需要多次拆卸圆底烧瓶，振荡后再安装进行水浴回流，需要实验人员一直值守。阵列水浴回流仪可以同时处理6个样品，通过搭载间歇磁力搅拌，免去了人工振荡过程，加上定时启停、自动升降功能，实现无需人员值守。实验比较了传统人工搭建水浴回流装置和阵列水浴回流仪皂化前处理过程，证明阵列水浴回流仪能够有效优化简化实验过程、减少人工操作、提升皂化前处理效率。
表1智能水浴冷凝回流提取仪参数设置
2.2样品加标回收实验
称取10g空白复合预混饲料样品12份，添加10mg维生素a乙酸酯标准品，分别使用自行搭建水浴回流装置和阵列水浴回流仪进行皂化前处理，经提取、浓缩后上机测试，计算两种装置回收率。自行搭建水浴回流装置回收率在94.1%~97.8%之间，阵列水浴回流仪回收率在97.3%~99.8%之间，阵列水浴回流仪回收率略优于自行搭建水浴回流装置，测试结果见表2。
表2 不同皂化装置回收率
2.3方法重复性
分别使用自行搭建水浴回流装置和阵列水浴回流仪对同一饲料样品进行前处理，两种装置分别进行6次平行测定。自行搭建水浴回流装置6平行测试相对标准偏差为3.75%，阵列水浴回流仪为1.74%，使用阵列水浴回流仪进行皂化前处理重复性优于自行搭建水浴回流装置，结果见表3。
表3 不同皂化装置重复性
3.结论
试验分别采用自行搭建水浴回流装置和阵列水浴回流仪对饲料中维生素含量进行测定，从整个测定过程来看，阵列水浴回流仪通过集成皂化前处理操作，尤其是间歇搅拌功能、自动升降功能，大大简化了实验过程，减少了人工操作。同时，多样品自动同时处理，在样品的准确度和重复性上要优于人工搭建水浴回流装置，阵列水浴回流仪可以很好应用于饲料中维生素a的测定。
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1.材料与方法
1.1仪器
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无水，分析纯，经检验无过氧化物；无水乙醇，分析纯；甲醇，色谱纯；2,6二叔丁基对甲酚（bht），分析纯；无水硫酸钠，分析纯；氮气（纯度99.9%）；碘化钾溶液100g/l；淀粉指示剂5g/l；硫代硫酸钠溶液50g/l;氢氧化钾溶液500g/l；l-抗坏血酸溶液5g/l；酚酞指示剂10g/l。
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3.结论
试验分别采用自行搭建水浴回流装置和阵列水浴回流仪对饲料中维生素含量进行测定，从整个测定过程来看，阵列水浴回流仪通过集成皂化前处理操作，尤其是间歇搅拌功能、自动升降功能，大大简化了实验过程，减少了人工操作。同时，多样品自动同时处理，在样品的准确度和重复性上要优于人工搭建水浴回流装置，阵列水浴回流仪可以很好应用于饲料中维生素a的测定。
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