细胞学堂 | 间充质干细胞(MSC)的鉴定方法
间充质干细胞(msc)是一种具有高度自我更新和多向分化潜能的干细胞，存在于骨髓、脂肪组织、脐血及多种胎儿组织。在不同的诱导条件下，可以向除造血干细胞以外的，骨、软骨、肌组织、皮肤、脂肪、神经等多种组织分化。间充质干细胞的易获得、易扩增、多潜能等特性使其在再生医学中的应用前景十分光明。
对于体外培养的间充质干细胞的鉴定，通常可以根据以下三条标准进行验证。
01
细胞形态学观察
可运用组织块贴壁法、酶消化法以及两种方法的结合分离出msc，通过传代培养后，进行形态学观察。几乎所有的msc都是贴壁生长，具有较强的贴壁能力。msc多数呈纤维细胞样生长，少量呈梭形或不规则三角形。
02
表面标志物鉴定
可采用流式细胞仪对msc的细胞表型进行鉴定，msc属混杂细胞群，其表面抗原也具有非专一性, 它可同时表达间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志，如粘附因子、生长因子和细胞因子受体以及整合素家族等。
msc的细胞表面标志物鉴定标准为：cd105、cd73和cd90的阳性率≥90%；而cd45、cd34、cd14、cd19和hla-dr呈阴性，阳性率≤5%。（如下图）
流式细胞仪检测 huc-msc 的表面标志物
需要注意的是，阳性标记不具特异性，并非每个细胞都同时表达cd105、cd73和cd90。
03
多向分化潜能鉴定
msc具有分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞的能力，可通过特异性染色鉴定体外成脂、成骨和成软骨诱导后的分化能力。
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成脂诱导分化鉴定
细胞成脂分化诱导2周左右，于倒置显微镜下观察，可见细胞质内出现油滴，经油红o染色后为红色。
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成骨诱导分化鉴定
细胞成骨分化诱导3周左右时，于倒置显微镜下观察，可见不透明区域，经茜素红染色后可见密集的红色沉淀物呈结节状。
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成软骨诱导分化鉴定
细胞成软骨分化诱导2周左右，于倒置显微镜下观察，可见细胞经阿利新蓝染色为淡蓝色。
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参考文献
[1] fernández vallone vb, romaniuk ma, choi h, labovsky v, otaegui j, chasseing na. mesenchymal stem cells and their use in therapy: what has been achieved? differentiation. 2013 jan;85(1-2):1-10.
[2] 郭子宽. 间充质干细胞及其临床应用中的几个问题[j]. 中国组织工程研究与临床康复, 2012, 16(1):10.
[3] 张德双, 陈娟. 人脐带间充质干细胞的体外获取、鉴定及标记. 华西医学, 2015, 30(11): 2067-2070.
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[1] fernández vallone vb, romaniuk ma, choi h, labovsky v, otaegui j, chasseing na. mesenchymal stem cells and their use in therapy: what has been achieved? differentiation. 2013 jan;85(1-2):1-10.
[2] 郭子宽. 间充质干细胞及其临床应用中的几个问题[j]. 中国组织工程研究与临床康复, 2012, 16(1):10.
[3] 张德双, 陈娟. 人脐带间充质干细胞的体外获取、鉴定及标记. 华西医学, 2015, 30(11): 2067-2070.
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