布病虎红平板凝集抗原的使用方法及注意事项
虎红平板凝集试验（rbt，rose bengal test）是国际贸易中牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的标准试验，在我国也用于人布鲁氏菌病监测的初筛。抗原是经培养灭活后，离心收集菌体用虎红染料染色后悬浮于乳酸缓冲液中制成。由于所用的抗原是酸性（ ph3.6-3.9 ）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的igm类抗体的凝集活性、检查的抗体是igg类，因此提高了反应的特异性。该方法灵敏度高，操作方便，检测快速且价格便宜，适于动物群体布鲁氏菌病的普查。
布鲁氏菌虎红平板凝集试验具体操作方法如下:
一、材料准备
1、布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原、布鲁氏菌标准阳性血清、布鲁氏菌阴性血清。
2、受检血清应新鲜,无明显蛋白凝块,无溶血。
3、洁净的玻片或玻璃板。在其上划分成4cm2的方格。
4、微量移液器及无菌吸头。
5、干净牙签或火柴杆。
二、操作方法
1、在玻璃板各方格标记受检血清编号,然后加入相应的血清25μl（动物布鲁氏菌病诊断技术gb/ 18646-2018）。
2、在各待检血清旁滴加虎红抗原25μl。
3、用灭菌牙签类小棒快速混匀血清和抗原，涂成2cm直径的圆形，于4分钟内观察结果。
三、结果判定
在标准阴性血清不出现凝集、标准阳性血清出现凝集时，试验成立，方可对受检血清进行判定。凡出现肉眼可见凝集现象者（“+”以上反应）判为阳性。
虎红平板凝集试验判定标准：
“—”无凝集,呈均匀粉红色
“+”稍能查到凝集,稍有卷边形成,凝集物间液体呈红色。
“++”形成较明显卷边,凝集块间液体稍清亮。
“+++”凝集反应较强,液体较清亮。
“++++”凝集块呈菌丛状,凝块间液体明显清亮。
四、注意事项
布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原储藏温度:2-8℃，使用前需充分摇匀，务必恢复至室温或18度以上后再检测。
试验应设标准阴、阳性血清对照。
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1、布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原、布鲁氏菌标准阳性血清、布鲁氏菌阴性血清。
2、受检血清应新鲜,无明显蛋白凝块,无溶血。
3、洁净的玻片或玻璃板。在其上划分成4cm2的方格。
4、微量移液器及无菌吸头。
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二、操作方法
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2、在各待检血清旁滴加虎红抗原25μl。
3、用灭菌牙签类小棒快速混匀血清和抗原，涂成2cm直径的圆形，于4分钟内观察结果。
三、结果判定
在标准阴性血清不出现凝集、标准阳性血清出现凝集时，试验成立，方可对受检血清进行判定。凡出现肉眼可见凝集现象者（“+”以上反应）判为阳性。
虎红平板凝集试验判定标准：
“—”无凝集,呈均匀粉红色
“+”稍能查到凝集,稍有卷边形成,凝集物间液体呈红色。
“++”形成较明显卷边,凝集块间液体稍清亮。
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