重组慢病毒的基本操作规范介绍

慢病毒是一种有包膜的rna病毒,直径为80-120nm,呈二十面体对称结构、球形。病毒颗粒最外层是包膜(包膜蛋白决定了感染细胞的类型),再往里依次为基质蛋白和衣壳,里面是两条相同的正股rna链和酶(逆转录酶、整合酶和蛋白酶)。
慢病毒(lentivirus)是逆转录病毒的一种,基因组为双链rna。但区别于一般的逆转录病毒,慢病毒具有更广的宿主范围,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
重组慢病毒载体是以hiv-1(人类免疫缺陷i 型病毒)为基础发展起来的工具载体,其毒性基因已经被剔除并被外源目的基因所取代,属于假型病毒(一次性感染能力而无复制产生新病毒能力)。将靶基因随机整合到宿主的基因组中,并且能够在细胞系中稳定表达若干代,可以进行稳转细胞株的筛选。被广泛应用于各种细胞系基因敲除、基因过表达、rna干扰。
在转染遗传物质到细胞基因组中的工作中,重组慢病毒载体是一个强大和有效的工具,基本操作规范如下:
1. 在实验室工作时,任何时候都必须穿着连体衣、隔离服或工作服;应戴上合适的手套和口罩。
2. 病毒操作时最好使用生物安全柜。如果使用普通的超净工作台操作病毒,请不要打开风机。
3. 所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。如果出现病毒污染,请立即用70%的酒精加1%sds溶液擦拭干净。
4. 如需离心,应使用密封性好的离心管,可用 parafilm 膜封口后离心,而且最好使用组织或细胞培养室内的离心机。
5. 用显微镜观察细胞感染情况时用遵从以下步骤:拧紧培养瓶或盖紧培养板,并在使用70%乙醇清理所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前,必须清除污染。废弃的含病毒的培养基加入84消毒液(1:20左右),浸泡一天后丢弃。接触过病毒的枪头,离心管,培养板等其他物品可用84消毒液稀释液处理,也可以用煮沸处理半小时或高压湿热灭菌(121℃,30min)。
6. 手套用完后,应先消毒再摘除,随后必须洗手。

分析各种常用储罐的结构
射频功率放大器的指标有哪些内容
安装工业可燃气体探测器需要满足哪些要求?
美国ASCO电磁阀选型依据
滚动接触角测定仪
重组慢病毒的基本操作规范介绍
污水处理厂处理技术方案
玻璃鳞片防腐施工
处理垃圾渗滤液主流技术不仅仅有DTRO膜,还有
P551039燃油滤芯的作用
直线电机的分类和选型
柴油机移动泵车快速简捷排涝供水作业
入室盗窃“收获满满” 出来就被逮个现行
老化试验箱的相关说明
三相数显电流表使用注意事项
电动蜗轮箱的结构和应用领域说明
EN标准INCONEL alloy FM 62精密带是什么材料
回水预制直埋发泡暖气塑料聚氨酯管施工方便
红外热成像仪的工作原理
如何使用户买到自己合适的电子天平、电子分析天平、电子精密天平