PCR实验室建设知识及成本估算

聚合酶链反应实验室又称基因扩增实验室,是聚合酶链反应(polymerasechainreaction)的大特定的脱氧核糖核酸片段,可视为生物体外的特殊脱氧核糖核酸复制。通过脱氧核糖核酸基因跟踪系统,可以快速掌握患者体内的病毒含量,其准确性高达纳米水平,准确检测乙肝病毒在患者体内的数量、复制性、感染性、感染性、需要服药、肝功能异常变化,pcr实验室设计可以及时判断患者使用哪种抗病物,判断药物的疗效,为临床治疗提供可靠的检验依据。
聚合酶链反应器是分子生物学研究和实验的常规方法,广泛应用于生物学的各个领域,如、乙肝、禽疫病、癌基因检测和诊断、脱氧核糖核酸指纹、个人识别、亲子鉴定和法医物证、动植物检疫、动物及其衍生产品检测、动物饲料、化妆品、食品卫生检测、转基因作物和转基因微生物检测等。
标准pcr实验室分为四个区域:试剂储存和准备区、样品处理区、核酸扩展区和产品分析区。为了避免交叉污染,进入各工作区域必须严格遵循单向方向,即只能从试剂储存和准备区→标本制备区→扩展反应混合物准备和扩展区→扩展产品分析区实验区之间的试剂和样品传递应通过传递窗口进行。
聚合酶链反应实验室可分散或组合。完成一组聚合酶链反应实验通常需要四个实验过程:试剂准备、样品处理、核酸扩散和产物分析。
分散式pcr实验室:
所谓分散式pcr实验室,是指完成上述实验过程的实验室相距较远,呈分散式布局。对于这种布局形式的pcr实验室,由于各实验不易相互干扰,不需要特殊条件。
组合式pcr实验室:
所谓组合式pcr实验室,是指完成pcr四个实验过程的实验室相邻布置,形成独立的实验区域。对于组合式pcr实验室,由于各实验室集中布置,容易造成相互干扰,对整体布局和屏障系统有一定要求。每个房间在入口处设置缓冲室,减少室内外空气交换。
pcr实验室的主要功能。
1.试剂储存和准备区的作用是:
储存试剂的制备、试剂的分装和膨胀反应混合液的准备、离心管、吸头等消耗品的储存和准备。储存试剂和用于标本制备的消耗品等材料应直接运输到试剂储存和准备区,不得通过膨胀检测区。试剂盒中的阳性对照品和质量控制品不应保存在该区域,应保存在标本处理区域。
2.标本制备区的功能如下:
核酸(rna、dna)的提取、储存和添加到扩增反应管中。对于涉及临床样品的操作,应符合生物安全二级实验室保护设备、个人保护和操作规范的要求。由于样品混合和核酸纯化过程中可能会发生气溶胶造成的污染,可以通过在该区域设置正压条件,避免从邻近区域进入该区域的气溶胶污染。为了避免样品之间的交叉污染,添加待测核酸后,必须覆盖含有反应混合物的反应管。对于有潜在感染危险的材料,必须在生物安全柜中打开盖子,并有明确的样品处理和灭活程序。
3.核酸扩增区的作用是:
脱氧核糖核酸合成、脱氧核糖核酸扩张和检测。为了避免气溶胶造成的污染,我们应该尽量减少在该区域的行走。必须注意的是,所有经过测试的反应管不得在该区域打开。
4.扩大产物分析区的作用是:
扩展片段的进一步分析和测量,如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、序列测量等。核酸扩展后的产品有多种分析方法,如膜上或微孔板或芯片上的探针杂交方法(放射性核素标记或非放射性核素标记)、直接或酶切后琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、southern转移、核酸序列测量方法、质谱分析等。
扩展产品分析区是pcr实验室最主要的扩展产品污染源,应注意避免通过该区的物品和工作服将扩展产品带出。采用pcr-elisa方法检测扩展产品时,必须用洗板机清洗板材,废液必须收集到1mol/lhcl中,且不能在实验室内倾倒,而应远离pcr实验室。使用过的吸头也必须放入1mol/lhcl中浸泡,然后放入垃圾袋中按程序处理,如焚烧。因为这个地区可能会使用一些可引起基因突变的有毒物质,如溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等,所以要注意实验者的安全保护。
聚合酶链反应实验室设计的主要依据和标准。
《医疗器械生产质量管理规范附录体外诊断试剂》、《医疗器械生产质量管理规范体外诊断试剂现场检验指导原则》中明确规定了pcr试剂的生产和检验环境。此外,现行卫生行业的法律法规、标准及相关文献规定了pcr检验实验室,主要涉及《国家临床检验规程》(第三版)、《医疗机构临床基因扩张管理办法》、《医疗机构临床基因扩张检验实验室工作指南》、《聚合酶链反应在临床诊断中的应用》等行业标准的相关要求。
pcr实验室建设要点。
1是主体结构
主体为洁净彩色钢板和铝合金型材。室内外角采用铝合金50内圆角铝,解决了容易污染、积灰、清洗困难的问题。结构牢固,线条简洁美观,密封性能好。
2标准三区分隔及压差控制
pcr过程分为三个独立的实验区:试剂制备、样品制备和pcr扩展检测。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立的实验区都有一个缓冲区。
聚合酶链反应实验室空调通风系统的设计和压力控制聚合酶链反应实验室没有严格的净化要求,但为了避免各实验区间交叉污染的可能性,应采用全排气流组织形式。同时,应严格控制输送和排气比例,以确保各实验区的压力要求。
3是消毒
uv灯安装在三个个实验区、三个缓冲区的顶部和转移窗中消毒。试剂制备区和标本制备区还设有移动紫外线灯,对试验台进行局部消毒。
4.机械连锁不锈钢传动窗
试剂和标本通过机械联锁不锈钢(不推荐电子联锁)传输窗口传输,保证试剂和标本在传输过程中不受污染(人物分流)。
5是地面
地面一般采用聚氯乙烯卷材地板或自流地板,整体性好。易于清洁和耐腐蚀。也可以使用水磨石地板或大瓷砖(至少800毫米×800毫米)接缝应小于2毫米。尽量避免灰尘产生和灰尘积聚。
6是照明
灯具应选择净化灯具,便于清洁和清洁。
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