2015版中国药典款冬花液相色谱分析
■《中国药典》 收载情况【来源】 本品为菊科植物款冬tussilago farfaral.的干燥花蕾。
【功能与主治】 润肺下气，止咳化痰。用于新久咳嗽，喘咳痰多，劳嗽咳血。
【含量测定】 款冬酮照液相色谱法（通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(85:15)为流动相；检测波长为220nm。理论板数按款冬酮峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备：取款冬酮对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含50μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末(过4号筛)约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率40khz)1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
■款冬花药材液相色谱方法的建立【色谱行为描述】
《中国药典》中款冬花的含量测定以款冬酮为质量评价依据，其在inertsil ods-3(4.6×250mm，5μm )中的色谱行为是：在流动相组成为甲醇-水系统时，峰与杂质峰距离较近，流动相的比例对款冬酮及相邻峰的分离有显著的影响，流动相的比例为甲醇-水（75:25）时其分离效果，款冬花色谱图中杂质峰与款冬酮峰的分离效果较好，且款冬酮峰的保留时间比较合适；柱温对款冬酮的保留时间及与相邻色谱峰的分离度有微小影响。*流动相配比范围：甲醇：水=（75-76）:（25-24），柱温范围：25-40℃。经过考察，在流动相甲醇-水比例为75:25，柱温40℃的色谱条件下能得到较满意的分析效果。
在上述色谱条件下，采用shim-pack vp-ods(4.6×250mm，5μm )色谱柱，柱效和采用inertsil ods-3(4.6×250mm，5μm )色谱柱相当，保留时间比采用inertsil ods-3(4.6×250mm，5μm )色谱柱短大约7min，亦可得到良好的分析效果。
样品来源： 本品为菊科植物款冬tussilago farfaral.的干燥花蕾。
对照品： 款冬酮（*成都生物研究所，批号：must-15092401，含量：98.92%）
对照品溶液的制备： 取款冬酮对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含50μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备： 取本品粉末(过4号筛)约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率40khz)1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。
*使用色谱条件： 仪器配置：
色谱柱： 5020-01732 inertsil ods-3 (4.6×250mm，5μm ) lc-20ad 高压泵
流动相： 甲醇-水（75:25） spd-10avp紫外可见光检测器
柱温： 40℃ dgu-20a3脱气机
检测波长： 220nm cto-20as柱温箱
流速： 1.0ml/min sil-10advp自动进样器
进样量： 10μl
*此条件同样适用于shim-pack vp-ods(4.6×250mm, 5μm)色谱柱，相关谱图见附注1。
■款冬酮对照品溶液：
■供试品溶液：
■款冬酮标准曲线：
■款冬酮的重复性：序号对照品（10μl）样品（10μl）
t/min 峰面积 t/min 峰面积
127.797 1294058 27.668 1517747
227.766 1289092 27.629 1517225
327.782 1291246 27.668 1519401
平均值27.782 1291465 27.655 1518124
rsd/%0.05 0.19 0.08 0.07
附注1：shim-pack vp-ods (4.6×250mm，5μm )色谱柱用于款冬花分析
■款冬酮对照品溶液：
■供试品溶液：
* 实验数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供
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色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(85:15)为流动相；检测波长为220nm。理论板数按款冬酮峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备：取款冬酮对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含50μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末(过4号筛)约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率40khz)1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
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t/min 峰面积 t/min 峰面积
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